Chercheur (Post-doctoral) en Développement D'une

Type de recrutement:
Poste ouvert en CDD
- Quotité de travail:
100%
- Niveau d'emploi:
A - Chercheur
- Durée du contrat:
Du 01 novembre 2024 au 31 octobre 2026
- Localisation:
IBS IBS
71 avenue des Martyrs
38054 Grenoble

Présentation de la structure

L’IBS est une Unité Mixte de Recherche (UMR 5075) créée par le Commissariat à l’Energie Atomique (CEA), le Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) et l’Université Grenoble Alpes (UGA).
Directeur : Winfried WEISSENHORN, Professeur Université Grenoble Alpes
Directeurs adjoints : Cécile BREYTON ; Directrice de recherche CNRS - Martin BLACKLEDGE ; Directeur de recherche CEA
Le rôle de l’IBS est de développer une recherche fondamentale et appliquée en biologie structurale intégrée. Les thèmes de recherche à l’IBS sont organisés autour de trois programmes avec de multiples interactions entre les différents programmes visant à favoriser la collaboration au sein des différents groupes de recherche de l’IBS.

Sous l’autorité de Franck Fieschi, le groupe « Membrane et Pathogènes » est composé de personnels permanents dont 5 chercheurs, 1 ingénieur de recherche, et 3 ingénieurs d’étude ou techniciens.
Le groupe étudie des protéines membranaires impliquées dans des interactions hôte-pathogènes, des mécanismes d’infection et la réponse immunitaire. Pour cela, en parallèle des systèmes biologiques étudiés, nous développons aussi de nouveaux outils (surfactants) et une expertise en biochimie et biophysique des protéines membranaires (SANS, AUC). Le groupe est composé de deux équipes de biochimistes ayant une expertise complémentaire à l’interface entre la chimie, la physique et la biologie cellulaire.
Deux équipes se distinguent au sein de ce groupe:
L’équipe « Structure et stabilité de protéines membraniares intégrales et assemblages de phages » animée par Cécile Breyton.
L’équipe de Franck Fieschi « Membrane et Immunité » focalisant la recherche sur les enzymes NOX eucaryotes et procaryotes d’un point de vue structural mais aussi fonctionnel. Les NOXs générent des espèces réactives de l’oxygène utilisées comme agent cytotoxique et aussi pour la signalisation dans beaucoup de tissus ; les dérégulations mènent au stress oxydatif et à des maladies ainsi que que sur les récepteurs. Le second focus de la recherche menée dans cette équipe

Missions principales

La mission principale sera de produire les proteoliposomes NOX2/p22phox (PLs) thérapeutiques dans une gangue lipidique native et contenant de la phosphocholine-azido afin de greffer des molécules pour le ciblage au niveau des macrophages pulmonaires. Le greffage chimique ne sera pas effectué par vous mais par un collaborateur chimiste (UGA). Vous aurez pour mission d’établir la preuve de concept in vitro (macrophages déficients en NOX2/p22phox) et chez l’animal (modèle souris CGD développé par un collaborateur Université de Tours).

Activités principales
- Production du complexe NOX2/p22phox à partir des cellules HEK293 infectés
- Caractérisation par méthodes biochimiques (Westernblot, cytométrie de flux, mesure de la production de ROS)
- Purification par affinité Streptag du complexe NOX2/p22phox
- Relipidation du complexe NOX2/p22phox pour former des PLs natifs et modifiés chimiquement
- Mise au point de la fusion des PLs dans la membrane plasmique de macrophages
- Test de restoration d’activité NADPH oxydase dans des macrophages deficients en cette enzyme in vitro et in vivo

Compétences attendues
- Connaissances en biologie moléculaire : clonage, infection virale de cellules eucaryotes, de cellules IPSC et différenciation en macrophages
- Connaissances en biologie cellulaire : culture de cellules eucaryotes en adhérence, en suspension, culture d’hybridomes
- Compétence pointue en cytométrie de flux et en microscopie à fluorescence confocale test de reconstitution d’activité par les PLs dans des macrophages déficients
- Connaissance en biochimie : Purification de protéines membranaires par affinité (anticorps ou tag strep), génération et caractérisation de protéoliposomes (DLS), purification d’anticorps monoclonaux par affinité protéine G. Mesure d’ac tivité enzymatique en cellules, dans des membranes purifiés et en « cell-free-system » à base de protéoliposomes, mesure par spectre différentiel reduit contre oxydé du cytochrome b558
- Autonomie, organisation, méthodologie, pugnacité, patience et logique
- Background scientifique solide
- Niveau d’anglais parlé et ecrit B2
- Bon sens du relationnel

Rémunération

A partir de 3020€ mensuel brut et en fonction de l’expérience.