Evaluation Des Dangers de Perturbateurs Endocriniens à Activité Glucocorticoïde Chez Les Embryons de Poissons Zèbres

**Evaluation des dangers de perturbateurs endocriniens à activité glucocorticoïde chez les embryons de poissons zèbres**:

- Réf **ABG-132282**
- Sujet de Thèse
- 28/05/2025
- Contrat doctoral
- INERIS
- Lieu de travail- Verneuil-en-Halatte - Les Hauts de France - France
- Intitulé du sujet- Evaluation des dangers de perturbateurs endocriniens à activité glucocorticoïde chez les embryons de poissons zèbres
- Champs scientifiques- Ecologie, environnement

**Description du sujet**:

- CONTEXTE ET OBJECTIFS DE LA THÈSE

**CONTEXTE**
- A l’heure actuelle, différents bioessais in vitro et in vivo, notamment sur embryons de poissons zèbres, sont utilisés pour l’évaluation des dangers des perturbateurs endocriniens. Ces bioessais permettent d’évaluer les modalités EATS (oestrogéniques, androgéniques, thyroïdiennes et stéroïdogéniques) des substances mais sont limités quant à la prise en compte d’autres modes d’action des substances sur le système endocrinien.
- Un axe endocrinien particulièrement important pour les organismes est l’axe hypothalamus-hypophyse-interrénales (HHI). Cet axe, contrôlé par la voie de signalisation du récepteur des glucocorticoïdes (GR) est impliqué dans de nombreux processus physiologiques comme l’immunité, le développement, le métabolisme ou encore le stress.
- Malgré le rôle central des glucocorticoïdes (GC) et de l’axe HHI pour les organismes il n’existe aucun test au niveau réglementaire pour évaluer les dangers des substances sur la signalisation GR et le fonctionnement de l’axe HHI. Seul un test in vitro de type gène rapporteur a récemment été pré-validé au sein de la plateforme PEPPER, qui permettra de cribler l’activité glucocorticoïde des substances.
- De plus, ces dernières années, il a été démontré une forte occurrence des activités glucocorticoïdes dans les eaux usées et dans certains cas une forte imprégnation des milieux aquatiques par des substances à activité glucocorticoïde. Bien qu’il ait été montré qu’elles pouvaient poser un risque pour les organismes aquatiques, notamment pour les poissons, peu d’informations sont pour l’heure disponibles sur les effets de ces substances sur les organismes aquatiques.

**ENJEUX SCIENTIFIQUES / OBJECTIFS**
- L’enjeu de cette thèse est de développer une approche méthodologique pour l’évaluation des dangers des substances à activité glucocorticoïde, pour lesquelles il n’existe aucun test réglementaire validé et aucune stratégie d’évaluation.
- La thèse devrait permettre d’acquérir des informations nouvelles sur les modes d’actions et les effets physiologiques et comportementaux de ces substances chez les poissons, et de proposer une stratégie pour l’évaluation de leurs dangers, basée sur des bioessais in vivo chez l’embryon de poisson zèbre.

**ENJEUX OPERATIONNELS**
- Ces dernières années différentes lignes directrices de l’OCDE utilisant des embryons de poissons ont été adoptées pour l’évaluation du caractère PE des substances (OCDE 250, 251 et 252) et des travaux sont en cours pour inclure de nouveaux paramètres de l’axe thyroïdien dans la ligne directrice OCDE 236. Toutefois, la prise en compte des activités endocrines autres que EATS des substances reste à élaborer. En effet, les tests actuels (in vitro, in vivo) ne considèrent pas la perturbation de voies de signalisation ou d’axes endocrine majeurs dont on sait qu’ils peuvent être perturbés et induire des réponses physiopathologiques et comportementales. De même, aucune stratégie raisonnée n’a à ce jour été élaborée pour permettre d’évaluer efficacement les dangers et les risques des PE.
- Les travaux engagés dans cette thèse viseront à combler ces manques et répondre aux attentes des instances scientifiques et réglementaires, en étudiant un axe physiologique fondamental, l’axe HHI.

**DEROULEMENT DES TRAVAUX DE THESE (METHODOLOGIE, ETAPES CLEFS)**
- Optimisation des bioessais pour le criblage des substances à activité glucocorticoïde_
- Les travaux engagés reposeront sur des modèles de poissons zèbres transgéniques originaux développés par l’Ineris dans le cadre de projets précédents. Ces modèles transgéniques (cyp11c1-GFP ; cyp3a65-GFP) expriment des gènes rapporteurs fluorescents sous le contrôle de promoteurs de gènes cibles des GC dans différents tissus (rein, intestin).
- Pour tester l’activation du GR et de la voie de synthèse des GC, l’expression de cyp11c1 et de cyp3a65 sera suivie in vivo chez les embryons des deux modèles transgéniques. Ces mesures de fluorescence in vivo seront complétées par la quantification de l’expression de gènes cibles impliqués dans la voie de signalisation GR (fkbp5, klf9, pomc ) par RT-qPCR, permettant pour certains de déterminer les interactions des GC avec d’autres organes cibles (système neuroendocrinien).
- Il s’agira dans cette partie du travail de déterminer quels bioessais ou combinaisons de bioessais et d’approches complémentaires (expression de gènes) sont les plus pertinentes pour l’étude des GC (effets les plus marqués, reproductib